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使用瓶子凍原液,這個過程中會出現什么問題。

更新時間:2019-08-12   點擊次數:3083次

首先我們了解一下裝有原液的瓶子在哪里凍?

  1. 把瓶子放入極冷的液體里面,
  2. 在超低溫冰箱里面存放
  3. 在速凍箱里面存放

這三種情況的優缺點:

在種情況,凍的過程省時,但是極速冷凍的時候瓶子會出現大量的冰晶,而不是大塊的冰。大量的小冰晶的出現使得溶液中蛋白和冰接觸的表面積劇增。同時溶液中大量細微的空氣和蛋白混在一起,在融的過程中,影響蛋白的活性。

第二種情況,是很多客戶現在正在使用的方法。直接放在℃的冰箱中。

               如果放一個5L的瓶子,(Thermo冰箱的現在4層,每層高度也只能放5L)

               在超低溫里面10-12個小時,如果多放幾個所需時間成倍的增加。

              有數據 表明,冰箱內放置24個 5L的瓶子,每個瓶子放3.5L的液體。設定溫度在-40℃,總共液體體積84L,所需時間100小時以上。后一個瓶子*凍住(離開冰點)需要80個小時左右。

這樣長時間緩慢冷凍,單個瓶子蛋白濃度會發生極大的不均勻。有數據表明在17小時的冷度,瓶子內部的濃度變化就會在10倍左右。如果80倍的話。濃度變化值則差別更大。

    同時,壓縮機 長時間不停歇工作,超低溫冰箱可能會出現故障(過熱),

 

第三種情況,速凍箱,具有和冰箱一樣溫度范圍,降溫速度快,同時機器帶有風扇,空氣可以充分循環,這種腔體很多帶有加溫設備,溫度均一性很好。一般在-70℃下,空載+/-3℃以內,滿載+/-2℃

由于速凍箱內部有大面積風扇,腔體能很好空氣流通。

有數據 表明,冰箱內放置24個 5L的瓶子,每個瓶子放3.5L的液體。設定溫度在-40℃,總共液體體積84L,所需時間10小時左右。

這個時間長短是大多數用戶可以接受的。 大部分的科研認為10幾個小時完成冷凍,單抗的活性影響不大。

 

 

現在說說瓶子凍融的優缺點。

每種不同體積大小的瓶子的時間差距明顯,這樣做工藝開發的時候只能使用同樣體積大小的瓶子

體積越大,時間越長。

凍瓶子很多種情況,瓶子底部都會突出,也就是瓶子會變形。

瓶子的存儲空間會很大。

瓶子中的液體會出現冷凍,開裂,再冷凍的反復凍融情況。

1個瓶子,5個瓶子,10個瓶子的冷凍曲線不一致。

 

在存取方面:

瓶子的優點,拜訪方便。拿取方便,存儲方便。但是占據關鍵大。

 

瓶子的分裝和Drain不方便。整個無菌過程不符合GMP要求。如果使用多孔的蓋子和管路,····分裝和排空這個過程就能保證無菌了。但是在冷凍和存儲又出現不安全隱患。

 

欲了解更多的速凍過程,請聯系研熠公司進行交流

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